Protocols : CellSpots CUSTOM Peptide Array Handling and strage CelluSpotsペプチドアレイは、冷暗所（2〜8℃）で保存して下さい。数ヶ月間は安定して使用できます。ご使用の際は、下記プロトコルをご参照下さい。 Blocking 非特異的吸着を防止するために、スライドをブロッキング溶液に浸し、オービタルシェーカー上で、室温／1〜4時間、ブロッキングを行います。4ºCで一晩のブロッキングも可能です。 Washing 最適な洗浄回数およびTween-20濃度は、結合アッセイに使用する抗体またはタンパク質に依存します。0.1% Tween-20を含むTBS-TまたはPBS-Tバッファーは、ほとんどのアプリケーションに適しています。ブロッキング溶液でスライドを5分間、2回洗浄した後、TBS-TまたはPBS-Tバッファーで5分間、3回の洗浄を行います。 Primary antibody or protein incubation ブロッキング溶液で一次抗体またはタンパク質を希釈します。希釈倍率は、抗体またはタンパク質ごとに経験的に決定されるものです。ペプチドアレイに、希釈した抗体またはタンパク質溶液とペプチドアレイをふりかけ、カバーガラスをつけて、室温で1〜4時間湿室内でインキュベートします。4℃で一晩インキュベートすることも可能です。 ブロッキング溶液中で慎重にカバーガラスを取り除き、上記（2.）の記述通りに洗浄します。 Secondary antibody incubation 二次抗体は、シグナル検出方法に応じて、AP／HRP／ビオチンおよび他のレポーター分子でラベルできます。二次抗体のブロッキング液による希釈率を変えてテストを行い、最適な濃度を求める必要があります。 ペプチドアレイに、希釈した二次抗体をふりかけ、カバーガラスを付けて、室温で1〜3時間湿室内でインキュベートします。ブロッキング溶液中で慎重にカバーガラスを取り除き、上記（2.）の記述通りに洗浄します。 Detection アレイ上のスポットに結合した抗体またはタンパク質は、様々な検出方法で可視化できます。「化学発光」「酵素による発色反応」「オートラジオグラフィー」などが利用できます。 Chemiluminescence (HRP labeled secondary antibody) 化学発光用の種々の検出キットが市販されています。高感度検出キットの一例として、「ECL Advance Western Blotting Detection Kit, RPN2135 : Amersham Biosciences（GE）」があります。 Enzymatic color development 酵素による発色反応には、NBT / BCIPを基質とするAP標識二次抗体を使用することができます。他の基質も同様に使用可能です。 Typical protocol (short version) 検出に使用する二次抗体によって、TBS / TBS-TバッファーまたはPBS / PBS-Tバッファーが選択されます。APラベルされた抗体には、TBS / TBS-Tバッファーを用います。 ペプチドアレイをブロッキング溶液に、1〜4時間浸します。 ペプチドアレイをブロッキング溶液で、5分間、2回洗浄し、続いてTBS-TまたはPBS-Tで、5分間、3回洗浄します。 ペプチドアレイに、希釈した抗体またはタンパク質溶液をふりかけ、カバーガラスをつけて、室温で1〜3時間または4ºCで一晩、湿室内でインキュベートします。 ブロッキング溶液中で慎重にカバーガラスを外し、ブロッキング溶液で5分間、2回ペプチドアレイを洗浄します。続いて、TBS-TまたはPBS-Tで5分間、3回洗浄します。 ペプチドアレイに希釈した二次抗体をふりかけ、カバーガラスをつけて、室温で1〜3時間湿室内でインキュベートします。 ブロッキング溶液中で慎重にカバーガラスを外し、ブロッキング溶液で5分間、2回ペプチドアレイを洗浄します。続いて、TBS-TまたはPBS-Tで、5分間、3回洗浄します。 シグナルの検出：使用する検出キットの説明書をご利用下さい。